• 产品名称: IP(免疫沉淀)
  • 产品编号: JSFW34
  • 上架时间: 2016-06-08
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免疫沉淀(IP): 
免疫沉淀是利用抗原抗体特异性反应纯化富集目的蛋白的一种方法。抗体与细胞裂解液或表达上清中相应的蛋白结合后,再与Protein AG或二抗偶联的agaoseSepharose beads孵育,通过离心得到beadsprotein AG或二抗-抗体-目的蛋白复合物,沉淀经洗涤后,重悬于电泳上样缓冲液,煮沸510 min,在高温及还原剂的作用下,抗原与抗体解离,离心收集上清,上清中包括目的蛋白和少量的杂蛋白。

免疫沉淀实验用途非常广泛,而且基于最基本的免疫沉淀实验衍生出了许多免疫沉淀相关实验手段(比如免疫共沉淀、染色质免疫沉淀)。

IP实验对抗体质量要求颇高,而且完备的实验设计是成功的基础,科佰生物有非常丰富的IP经验,会帮助客户严格设计实验,提高成功率。

免疫沉淀:

原理: IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“proreinA"特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法。目前多用精制的proreinA预先结合固化在argarosebeads上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。

实验流程:

1. 细胞裂解;

2. 总蛋白定量;

3. 去除非特异性结合蛋白;

4. 加入抗体和Preotein A/G agarose beads孵育;

5. 洗脱。

6. WB检测沉淀下来的目的蛋白(可选,更外收费)。

样品要求:

1. 客户需提供待检测样品、免疫沉淀用抗体(也可由我们代购);

2. 待检测样品可以是直接的待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织或细菌样品,但需收取蛋白抽提费用。样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

3. 免疫沉淀常尽量提供未经冻存的新鲜蛋白样品。

免疫共沉淀:

原理:免疫共沉淀(Co-ImmunoprecipitationCo-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

实验流程:

1. 细胞裂解;

2. 总蛋白定量;

3. 去除非特异性结合蛋白;

4. 加入蛋白X的抗体和Preotein A/G agarose beads孵育;

5. 洗脱。

6. WB检测蛋白Y

样品要求:

1. 客户需提供待检测样品、免疫沉淀用抗体和WB检测用抗体(抗体也可由我们代购);

2. 待检测样品可以是直接的待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织或细菌样品,但需收取蛋白抽提费用。样本收集后应立即-20度保存,若长期保存应-80度保存;

3. 免疫沉淀常尽量提供未经冻存的新鲜蛋白样品。

染色质免疫沉淀:

染色质免疫共沉淀技术(Chromatin ImmunoprecipitationChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具,利用该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。

原理:

基本原理是在活细胞状态下以甲醛固定蛋白质-DNA复合物,超声将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后加入目的蛋白抗体,通过抗体沉淀靶蛋白-DNA复合物,通过洗脱的方法得到富集的靶蛋白-DNA复合物,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测(PCR分析、测序),从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

实验流程:

1. 甲醛固定细胞,胞内DNA与蛋白质交联;

2. 收集细胞,超声破碎;

3. 加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合;

4. 加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,沉淀;

5. 对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合;

6. 洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA复合物;

7. 解交联,纯化富集的DNA片断;

7. PCR和测序分析,或基因芯片分析;

样品要求:

1. 客户需提供待检测样品、免疫沉淀用抗体(抗体也可由我们代购);

2. 待检测样品可以是直接的待检测蛋白样品,也可以是细胞、组织或细菌样品。样本收集后应用甲醛固定,不能冻存;

3. 染色质免疫沉淀必须提供未经冻存的新鲜样品。

提交的产品和资料:

实验报告

订购方法:

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