• 产品名称: Western-Blot(蛋白免疫印迹)
  • 产品编号: JSFW31
  • 上架时间: 2016-06-08
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Western Blot检测: 
蛋白印迹(Western Blot)是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法,用于检测经电泳或斑点杂交后固定于膜上的蛋白质的检测。特异、稳定的液态酶标抗体和相应的底物,保证了快速、准确的检测;而避免了放射性物质的使用,现已成为蛋白分析的一种常规技术,对蛋白进行定性和半定量分析。

科佰生物团队有丰富的WB经验,成功完成了各种蛋白的检测,除了传统的流程外,公司也掌握了快速转膜法(一天完成WB),红外二抗检测(Oddssey)等技术。

科佰生物拥有现货300多种进口一抗,全部经过内部实验验证质量,免费使用,不收取任何费用,WB整个流程选用进口材料(Bio-radinvitrogen),确保实验数据的真实、美观。

促销价1000/膜(10孔、15孔),2000/膜(26孔),包含实验的所有费用。

技术路线:

1.蛋白质抽提

  实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。

  实验对象为细胞样品,每份样品取1×1061×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。

2. 蛋白质定量:按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。

3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE):将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。

4. 蛋白质转移到PVDF,Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,300mA恒流条件下,4°C转移90分钟左右。

5. western blot膜的封闭和抗体孵育。

  膜在5%脱脂奶粉(磷酸化蛋白用BSA)溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。

  封闭过的膜加入一抗4°C孵育过夜,抗原抗体结合。

  加入HRP标记的二抗体以结合一抗,室温孵育膜1小时。

6. western blot结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。

  当加入的二抗选择外红荧光二抗时,用Oddssey曝光条带。

7. western blot数据分析,可定性、半定量分析。

8. 提供实验报告,包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。

样品要求:

客户需新鲜或正确保存的蛋白样品,目的蛋白阳性表达样品(如果有阳性表达的细胞或组织),检测目的蛋白的一抗(建议由科佰生物代购)。

样品要求为:

·裂解样品总蛋白量>500ug/样品;

·细胞样品总蛋白浓度>1mg/ml

·组织样品总蛋白浓度10-15mg/ml

服务说明:

1. 建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白或有阳性表达的细胞或组织)作为阳性对照

2. 每张膜(小号)可检测1-8个样品,大号膜可检测1-24个样品;

3. 一抗需在正确条件下保存,避免污染及反复冻融;

4. 如需科佰生物进行数据分析,请另询价。

提交的产品和资料:

1.曝光结果(胶片和扫描图);

2.实验报告。

订购方法:
1、询价及订购请填写"询价单",并发送邮件至sales@cobioer.com
2、根据客户信息,我们会上门取样品
3、如需帮助,请发送邮件至tech@cobioer.com或拨打025-86880024,科佰生物的技术支持将竭诚为您服务。

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