• 产品名称: 慢病毒包装
  • 产品编号: JSFW12
  • 上架时间: 2016-06-08
  • 浏览次数: 193
  • 市场价:
  • 零售价:
  • 已销售数量:0件
  • 评论信息
  • 购买数量:  购买数量不能低于最少订购数量!

购买 询价 收藏 QQ交流 好友推荐

慢病毒包装: 
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生RNAi干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。

慢病毒包装的优点:

1、能将外源基因有效整合入宿主染色体,外源基因表达水平较高、表达稳定;

2、广泛的宿主,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;

3、适用范围广,可用于体外细胞系和活体动物模型,研究基因和RNAi等;

4、转导效率高,不需要转染试剂,目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。

科佰生物拥有丰富的病毒包装经验,成功为很多客户包装出需要的病毒,并且完成相应的功能检测。

慢病毒概述:

慢病毒( Lentivirus)属于逆转录病毒科(Retroviridae),为RNA病毒,如人免疫缺陷病毒(HIV)、猫免疫缺陷病毒(FIV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)、牛免疫缺陷病毒等。由于对HIV-1的研究最广泛最深入,对其生物学特性最为了解,因此HIV-1来源的慢病毒载体已成为其中的代表。

HIV-1为双链RNA病毒,共有9个基因,如图1所示。gagpolenv3个基因编码病毒的基本结构,tatrev为调节基因,vifvprvpunef 4个为辅助基因。其中,gag基因编码病毒的核心蛋白,包括基质蛋白、衣壳蛋白、核衣壳蛋白;pol基因编码病毒复制所需的酶,如反转录酶、整合酶、蛋白酶,env基因编码病毒的包膜糖蛋白,决定病毒感染宿主的靶向性。rev编码的蛋白调节gagpolenv的表达水平,tat编码的蛋白参与RNA转录的控制。4个辅助基因编码的蛋白则作为毒力因子参与宿主细胞的识别和感染。两端为长末端重复序列(LTR),内含复制所需的顺式作用元件,如包装信号元件Ψ。

第一代慢病毒载体系统是以三质粒系统为代表,该系统由包装质粒、包膜质粒及载体质粒3种质粒组成。包装质粒是HIV-1前病毒基因组5’端LTR由巨细胞病毒早期启动子取代,3LTRSV40 polyA序列取代。包装成分分别构建在两个质粒上,一个表达gagpol,另一个表达env。载体质粒携带了5’端LTR,和全部5’端非翻译区域,另外还带有rev应答元件(RRE)。包膜表达质粒使用水疱性口炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)用来代替了原病毒的env基因。

第二代慢病毒载体系统是在第一代的基础上进行改进,在包装质粒中删除了HIV的所有辅助基因(vifvprvpunef基因)。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和感染能力,同时增加了载体的安全性。

第三代慢病毒载体系统由四质粒代替原有的三质粒包装系统。将rev基因单独放在一个包装质粒上。同时又增加了两个安全特性:一是构建自身失活的慢病毒载体,即删除了U3区的3LTR,使载体失去HIV-1增强子及启动子序列,即使存在所有的病毒蛋白也不能转录出RNA;二是去除了tat基因,用异源启动子序列代替,这样原始的HIV-1基因组中的9个慢病毒载体中只保留了3(gagpolrev)。因此第三代慢病毒载体系统更加安全。

技术路线:

1.获得目的基因序列;

2.构建慢病毒载体;

3.重组质粒和包装质粒共转,包装病毒;

4.病毒纯化、浓缩;

5.滴度测定。

6.对照组和实验组感染细胞,利用抗生素筛选,得到稳定单克隆细胞株(可选)。

案列展示:

服务说明:

1.客户提供目的基因的序列,如果提供模板,请告知载体、酶切稳点等信息;

2.若实验材料为原代细胞或者特殊培养的细胞,请先咨询;

3.公司默认提供病毒滴度为1x108-1x109TU/ml,规格1ml

4.目的蛋白的功能验证另外收费。

提交的产品和资料:

1.实验报告;

2.构建好的病毒重组质粒;

3.提供至少1ml滴度>1x108-1x109TU/m的病毒.

订购方法:
1、询价及订购请填写"询价单",并发送邮件至sales@cobioer.com
2、根据客户信息,我们会上门取样品
3、如需帮助,请发送邮件至tech@cobioer.com或拨打025-86880024,科佰生物的技术支持将竭诚为您服务。

关键词: