MRD是指治疗后体内残留的肿瘤细胞或者标志物，通常的翻译有3种，微小残留病灶（Minimal Residual Disease）、可检测残留病灶（Measurable Residual Disease）、分子残留病灶（Molecular Residual Disease）。

微小残留病灶（Minimal Residual Disease）一词最早是出现在血液瘤中，是指治疗后残留的肿瘤细胞很少，很微小，常规检测的灵敏度不足以检测到，一般是由于药物不应答、药物耐药等等原因，因此此时MRD的检测可以是分子检测（比如NGS），可以是表面标志物检测（比如NGF）。而可检测残留病灶（Measurable Residual Disease）则侧重于可检测到的角度，对残留病灶的研究限于可以检测到的前提下，而后的分子残留病灶（Molecular Residual Disease）主要是指分子诊断可以检测肿瘤的残留，主要是通过对ctDNA的检测，这个时候适用于血液瘤和实体瘤。

MRD是肿瘤耐药、复发的重要因素，是预后判断的重要指标。在2021年版非小细胞肺癌MRD检测的专家共识中，有一段描述：在一项前瞻性多中心研究中，共入组101例带有体细胞突变的早期乳腺癌患者，通过dPCR动态追踪术后血浆ctDNA，结果提示ctDNA阳性与患者疾病复发明确相关【风险比HR=25.2，95%可信区间CI 6.7-95.6， p<0.001】，且ctDNA较影像学提前预示疾病复发，中位10.7个月（95% CI 8.1-19.1个月）。另一项入组130例II-III期结肠癌的多中心队列研究中，通过多重PCR捕获的NGS监测患者根治性切除术后ctDNA状态，结果提示术后30天ctDNA阳性患者复发风险远高于阴性患者（HR=17.5，95% CI 5.4-56.4，p<0.001）。

ctDNA的MDR检测现状

现有的针对ctDNA的MRD检测主要有2条技术路线：tumor-agnostic -assays(肿瘤未知分析)和tumor-informed assays(肿瘤知情/先验分析)，其中tumor-agnostic -assays仅对血浆检测，利用的是固定的panel（一般为驱动基因和靶向药物基因，也会多组学方法）和分析方法对ctDNA做检测，做分析，代表产品Guardant Health公司的Guardant Reveal；tumor-informed assays需要对原发肿瘤组织进行测序（一般为WES），来鉴定患者的特异基因组变异图谱，然后再定制个性化的panel，针对ctDNA做检测，也就是说需要对组织和血浆都做检测，代表产品为Natera公司的Signatera。国内IVD公司对MRD的检测，截至发稿前，小编遇到的tumor-informed assays为多。

MRD技术难度很大的一个方面是对超低频突变的检测能力和稳定性，以非小细胞肺癌为例，在早期NSCLC患者血浆中位cfDNA的浓度为7.69ng/mL，换算在10mL血浆(20ml全血)中含有大概20,000个单倍体基因组（3.3pg），考虑到cfDNA建库时的损耗以及至少存在2条相同的变异基因序列，10mL血浆中ctDNA检测到的极限分子信号为0.02%水平。另外，从TRACERx研究数据推算，在1cm³体积的肿瘤情况下, 10mL血浆中大概含有2条肿瘤来源DNA分子。因此，在NSCLC中进行MRD检测时，该检测方法必须可稳定检测出丰度≥ 0.02%的ctDNA。这里有个重要的技术策略，就是Sample Level的策略，对于site level的0.02%甚至更低，可以通过samples Level来提高灵敏度。

科佰生物

针对ctDNA检测的MRD诊断IVD的开发，少不了的是性能评价，自然也是少不了标准品的开发，科佰生物是一家专注IVD研发中诊断阳性参考品、检测限参考品、精密度参考品的研发生产型企业，针对ctDNA的超低频标准品的开发，我们计划开发2类产品（Art-base and Nat-base），希望得到行业专家更多的建议。
 

针对tumor-agnostic-assays的检测方法，主要还是满足不同panel的定制标准品需求，类似与液体活检ctDNA标准品的定制，可以针对性的开发针对不同癌种的panel组合，这里我们倾向纳入小panel、中panel、大panel的差异位点合集，同时倾向于放入致病和疑似致病的位点，组成合集。首要解决的问题是超低肿瘤占比带来的超低频突变的定标问题，我们知道dPCR的检测限一般为0.1%，低于0.1%的频率一般很难与阴性相区分，因此对于超低频的位点的检测一般是使用超深度的NGS来定标，除了血液瘤外，国内暂时没有其他肿瘤获批的MRD检测试剂盒，很多都是摸着石头过河的，暂时无法通过上市的超深度的NGS试剂盒来定标，这个没有特别好的解决办法，只能在混样的稀释工艺上，尽可能做到准确和一致。
 

针对tumor-informed assays的检测方法，按照工艺上的描述，先是定制类的标准品开发，针对待测样本组织开展WES检测，根据检测结果设计适合超深度ctDNA检测的panel，比如捕获法的话，重点在优化探针的性能，同时针对已知的突变开发对应的标准品。同样的，也会遇到超低肿瘤占比带来的超低频突变的定标问题。在此，科佰生物也是希望能在与探针设计合成的公司达成合作，在复发监测的有限时效内，完成panel的开发和性能评价。

MRD检测意义

MRD的检测，针对ctDNA的检测已经在临床多种肿瘤复发监测中表征出明确的临床检测意义，临床亟待MRD的检测试剂盒，帮忙指导患者的辅助治疗，复发监测。