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技术服务

科佰生物的分子生物学平台提供基因合成、基因测序、核酸提取、载体构建质粒抽提、基因改造PCR、RT-PCR、基因表型分析

分子生物学服务

提供基因合成、基因测序、载体构建、质粒抽提、Q-PCR、STR鉴定服务等等 

病毒包装服务

提供高滴度慢病毒包装、腺病毒包装服务,涉及过表达,Knock-down,Knock-out等等 

蛋白工程服务

提供原核表达系统、哺乳动物表达系统、大规模蛋白表达系统等服务 

抗体工程服务

提供各类免疫检测,比如WB、ELISA、IP、IF、IHC、FACS等等 

细胞工程服务

提供细胞培养、稳定细胞株构建、RNAi研究、细胞表型分析等等 

药物筛选服务

围绕GPCR、Ion channel、Kinase等靶点开展药物筛选服务。

  • 产品名称: 细胞RNAi技术

RNAi技术服务: 
近年来的研究表明,将与mRNA同源的正义RNA和反义RNA组成的双链RNAdsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,从而抑制其相应基因的表达。这种转录后基因沉默机制(Post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。由于RNAi具有高度的序列专一性,可以特异地使特定基因沉默,获得功能丧失或降低突变,因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具,用于功能基因组的研究。

科佰生物应用国外知名公司的RNAi Designer平台,可对靶基因序列进行干扰位置效应评价和序列同源型分析,完成siRNA/miRNA多种序列的的设计,并提供从siRNA合成、RNAi载体构建到RNAi功能验证等全面的RNAi解决方案。

siRNA合成:

对于瞬时基因沉默实验,化学合成siRNA的方法操作简便,容易获得高水平的瞬时沉默效果,特异性强。我们通过严格设计来增强siRNA的专一性;针对某靶基因设计的3siRNA可保证其中两条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。

RNAi效应阶段,siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complexRISC)。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上,并在距离siRNA 3’端12个碱基的位置切割mRNA

实验流程:

1)根据序列信息,进行化学合成;

2)纯化及定量;

3)冻干处理;

4)细胞转染预实验,优化转染条件;

5)瞬时转染或稳定转染;

6RT-PCRWestern blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供:

1目的基因的Accession NumberHumanMouseRat种属)以及技术要求(包括ODnmols的精确数量、纯化类型和修饰要求等);

2细胞株和详细的细胞培养的操作步骤;

3一抗(如果需要Western blot检测)。

我们提供:

1)转染效率分析;

2Knockdown结果。

质量保证:

针对某靶基因设计的3siRNA可保证其中2条的Knockdown效率达到75%(在转染效率大于80%的情况下)。

shRNA的构建:

构建shRNA表达载体,实现shRNA在细胞中稳定表达,能够弥补瞬时转染持续时间短的不足。

服务流程:

1mRNA序列分析;

2)引物设计及合成;

3)单链互补引物退火;

4)将片段克隆至载体;

5)测序以确保插入序列正确性;

6)细胞转染预实验,优化转染条件;

7)瞬时转染或稳定转染;

8RT-PCRWestern blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供:

1目的基因的Accession NumberHumanMouseRat种属);

2细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

3一抗(如果需要Western blot检测)。

我们提供:

1构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌;

2测序报告

3转染效率分析

4Knockdown结果。

质量保证:

针对某靶基因设计的3shRNA序列,在转染效率>80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。

miRNA的构建:

RNAi载体利用细胞内源性的miRNA加工机制,相比传统shRNA载体可更高效地表达RNA发夹结构,并具有采用GFP进行表达追踪的优点。每个基因设计的4条序列我们保证至少有2条可以达到至少70%转录水平的Knockdown效率(在转染效率大于80%的情况下)。

实验流程:

1)针对特定基因,设计miR RNAi序列,合成该序列并退火生成双链DNA

2)将DNA与载体连接并转化;

3)测序验证miRNA序列的正确性;

4)细胞转染预实验,优化转染条件;

5)瞬时转染或稳定转染;

6RT-PCRWestern blot检测转染后某一时间点靶基因的RNA水平或蛋白水平的变化。

客户提供:

1目的基因的Accession NumberHumanMouseRat种属);

2细胞株和详细的细胞培养的操作步骤

3一抗(如果需要Western blot检测)。

我们提供:

1构建好的表达载体和相应的甘油菌;赠送阴性对照甘油菌;

2测序报告

3转染效率分析

4Knockdown结果。

质量保证:

针对某靶基因设计的3miRNA序列,在转染效率>80%的前提下,我们保证至少有1个克隆可以达到70%转录水平的沉默效率。

服务说明:

1. RNAi技术服务不包括基因功能检测,如需检测,需要另外评估和收费;

2. 客户可以提供实验原材料,也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库,也可以由我们公司代购;

订购方法:

 如需帮助,请发送邮件至sales@cobioer.com或拨打4008750250,科佰生物的技术支持将竭诚为您服务。