T细胞在癌症、感染和自身免疫性疾病相关的不同类型的免疫反应中都发挥着至关重要的作用。T细胞与抗原呈递细胞的特异性相互作用往往决定了T细胞的命运并调节其抗肿瘤反应。基础及临床研究发现了许多调节T细胞功能的免疫调节分子，其中，表达在T细胞上的免疫检查点分子通过激活信号（共刺激分子）或抑制信号（共抑制分子）调节T细胞功能，在免疫系统中起着核心作用。目前，靶向T细胞功能的免疫检查点抗体疗法已经获得了激动人心的疗效，取得了极大的成功，其中包括针对程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）及其配体PD-L1的Pembrolizumab， Durvalumab以及抗细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA–4）的Ipilimumab等单抗药物已广泛运用于黑色素瘤、转移性尿路上皮癌、膀胱癌，肺癌等各种肿瘤患者。

在迄今发现的免疫检查点分子中，CTLA-4抑制T细胞的作用机制是为人们最深入了解的机制之一。CTLA-4，又称CD152，是一种跨膜糖蛋白，可与CD28竞争性地结合抗原呈递细胞上的CD80（B7-1）和CD86（B7-2）蛋白，当与配体结合时，可作为T细胞激活的“关闭”开关，针对CTLA4的单抗Ipilimumab是第一个被成功用于黑色素瘤患者的免疫检查点药物。

PD-1（也称为CD279），是一种T细胞表面受体，通过与配体其PD-L1和PD-L2的相互作用对抑制T细胞活性起着重要作用。与CTLA-4信号类似，PD-1结合其配体抑制T细胞增殖，细胞因子如干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子和白细胞介素2（IL-2）的产生，并减少T细胞的存活，但与CTLA-4不同的是，它主要调节组织和肿瘤内的效应T细胞活性，而不影响淋巴器官中的T细胞活化。

药物研发现状

尽管通过抗体药物对免疫检查点信号阻断在癌症治疗中取得了显著的成功，但目前，大多数患者仍不能从单一靶点的阻断中获益。例如，虽然临床上针对PD-1和CTLA-4通路的抗体药物，已被用于多种癌症适应症，但大多数患者单一使用PD-1或CTLA-4阻断剂并无效果。因此，针对一种以上的免疫检查点抗原的抗体组合疗法被认为是一种潜在的有效策略。临床前动物实验表明，联合阻断CTLA-4和PD-1信号通路可延长B16黑色素瘤模型和K7M2转移性骨肉瘤模型的动物存活时间，而单独使用抗体阻断CTLA-4或PD-1则效果有限。而在临床上，PD-1/L1与CTLA4的抗体组合疗法也已被广泛研究及应用，早在2015年，Nivolimab+Ipilimumab的联合方案即率先获美国FDA批准治疗黑色素瘤，成为上市的双I-O联合方案，此后又有多个适应症获批（肾癌、肝癌及结直肠癌等）。

此外，阿斯利康的I药（Imfinzi）联合tremelimumab也在不同癌种上获得了积极的临床效果。此外，国内一些药企也在开展多个类似的联合用药的临床实验，如和铂医药就其CTLA4抗体HBM4003与君实生物的PD-1单抗联合治疗方案已经在黑色素瘤，晚期非小细胞肺癌，晚期肝细胞癌，晚期神经内分泌瘤/癌以及其它多种实体瘤上开展了临床实验；而祐和医药也在前几日宣布NMPA批准了其在研创新药抗CD40单抗YH003、抗CTLA-4单抗YH001联合抗PD-1帕博利珠人源化单克隆抗体注射液的一期临床试验IND申请。

尽管CTLA-4和PD-1/L1联合使用疗法取得了不错的进展，但在有些临床案例中两者联合并没有获得倍增的疗效，反而增加了毒副作用的风险，这既可能取决于不同的临床方案和病人选择，也与同时使用两种药物产生的双免疫毒性相关，另外联合使用往往价格昂贵，对于肿瘤患者来说也是巨大的经济负担。为了进一步提高疗效，减少毒副作用，随着近年来双抗技术的发展，同时靶向CTLA4和PD-1/L1的双抗药物也在积极的开发中，康方生物的AK104是优先进入临床试验的PD-1 x CTLA-4双抗药物，该药于2017年10在澳大利亚进入I期临床,在国内，去年8月NMPA也授予其新药上市申请的优先审评资格，用于治疗复发或转移性宫颈癌，有望成为第一个获得批准上市的CTLA4/PD-1双特异性抗体药物;而国外药企阿斯利康开发的PD-1 x CTLA-4双抗药物MEDI5752也紧随其后，于2018年4月在澳大利亚进入临床；而康宁杰瑞开发的KN046则是一款同时靶向CTLA-4和PD-L1的双抗药物，目前该药物在澳洲，中国，美国也均已获批临床试验，处于不同的临床试验阶段。
 

针对CTLA-4&PD-1/L1抗体药物的研发，科佰生物特别开发了CTLA&PD-1/L1双靶点细胞筛选模型，可从细胞水平功能性的测活及评估CTLA4&PD-1/L1联合用药以及双特性抗体的药效，产品信息及相关数据如下：

PD-1/CTLA4 Dual Effector Reporter Cells CBP74150

PD-L1/CD80&CD86 aAPC Cells CBP74151

Fig 1. The CTLA-4+PD-1 Combination Reporter Assay reflects the mechanism of action of biologics designed to block the PD-1/PD-L1 and CTLA-4/CD80&86 interaction. PD-1/CTLA-4 Dual Effector Cells were incubated with PD-L1/CD80&86 aAPC Cells in the presence of serial titrations of Anti-CTLA-4, Anti-PD-1 or both of the blocking Abs as indicated.

药物靶点模型

报告基因细胞模型可以很好的反映分子作用机制，同时具备更小的变异性和更好的可操作性，已被中检院及药企广泛应用于抗体药物生物活性的检定，对于药物研发、质量控制、批次放行都有重要意义。

科佰生物公司十分重视研发创新，凭借细胞功能改造技术、高精度和灵活的基因编辑工具平台，提供包括激酶，GPCR，免疫治疗，耐药等多类疾病靶点的药物检测细胞模型。目前已覆盖四百多株现货细胞模型，同时提供高质量的Cell-base生物测活服务。

免疫治疗靶点细胞模型

● T Cells Activation Assays (NFAT, IL2, NFkB….)

● Fc Effectors Activity Assays ( ADCC, ADCPs…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Inhibitory Targets (PD-1/PD-L1&2, TIGIT/CD155, CTLA4, LAG3, LILRB4/APOE, CD112R/CD112, SIRPa/CD47, TIM-3, BTLA/HVEM, CD161/CLEC2D, TIGIT&PD-1, LAG3&PD-1, CTLA4&PD-1 Combi…)

● Immune Checkpoint Bioassays: Co-Stimulatory Targets (OX40, 4-1BB, GITR, CD27, HVEM/LIGHT, CD28…)

● Cytokines and Growth Factor Assays ( BCMA, TGFβ, EGF, CSF1R,IL2, 15, IL4&13, IL6, IL11, IL12, IL23, IL36, IFNs,RANKL…)

● Others (TLR family members, STING，A2A family members, SARS Cov2…)