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腺病毒包装

腺病毒是一种线性双链DNA病毒,由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。
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腺病毒包装:

腺病毒是一种线性双链DNA病毒,由于其具有宿主范围广、可感染分裂和非分裂细胞、高滴度制备、外源基因装载容量大等优点,重组腺病毒已越来越广泛地被应用于基础研究和临床试验中,并成为世界上最常用的基因治疗载体之一。

腺病毒包装的优点:

1、可感染的细胞种类多,宿主广泛;

2、感染效率高,特别适合质粒载体转染效率低的细胞,如原代细胞、神经细胞等,且目的蛋白表达水平高;

3、可包装大片段的外源基因,高达10kb;

4、不整合到细胞染色体中,生物安全性高。

腺病毒包装技术主要原理是将目的片段克隆到腺病毒表达载体上,表达载体和包装质粒通过重组导入腺病毒包装细胞进行包装,包装好的病毒进一步进行扩增和滴度测定。

科佰生物拥有丰富的病毒包装经验,成功为很多客户包装出需要的病毒。公司提供2种较常用的系统:AdEasy、AdMAX。

AdEasy系统:

AdEasy包装系统主要的特点是利用Cre/loxP系统在大肠杆菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因组的过程,获得环状的重组腺病毒基因组,并且具有在细菌中复制的必需元件。将重组腺病毒基因组酶切线性化后转染HEK293细胞,避免了双质粒共转染得到重组腺病毒。

使用这个系统需要注意以下问题:

1.要用能表达Cre重组酶的特定的大肠杆菌,建议建立菌种库以免细菌发生变化;

2.由于重组是在细菌中发生的,微小的基因组变化不易发现;

3.要获得高品质的重组腺病毒毒种(高病毒产量、高目的基因表达)应挑选多个重组腺病毒质粒,分别转染HEK293细胞,获得多个重组病毒来筛选。

可根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等

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AdMAX系统:

AdMax包装系统是通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的包装质粒共转染HEK293细胞,利用Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒。这个系统有多种优势,包括操作简便、重组效率高、获得的病毒产率高、目的基因的表达水平高(因为mCMV启动子比hCMV启动子强若干倍)等。

可根据不同的研究需求构建腺病毒穿梭载体,如用于RNAi的腺病毒载体、用于基因过表达的腺病毒载体、用于启动子活性研究的腺病毒载体等

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技术流程:

1.获得目的基因序列;

2.构建病毒表达载体质粒;

3.表达载体质粒和包装质粒重组;

4.感染HEK293,包装出病毒;

5.病毒扩增、浓缩;

6.滴度测定。

服务说明:

1.客户提供目的基因的序列,如果提供模板,请告知载体、酶切稳点等信息;

2.默认使用AdEasy系统,有明确要求请告知;

3.序列过长可能影响病毒滴度;

4.目的蛋白的功能验证另外收费。

提交的产品和资料:

1.实验报告;

2.提供至少1ml滴度>10^10PFU/ml的病毒,特殊基因除外;

订购方法:

如需帮助,请发送邮件至sales@cobioer.com或拨打4008750250,科佰生物的技术支持将竭诚为您服务。

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