荧光定量PCR检测

▏ 服务原理及背景

实时荧光定量PCR在检测体系中加入荧光基团，通过PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测，从而实现对起始模板的定量及定性分析。随着PCR反应的不断进行，带荧光的PCR产物逐步累积，信号强度等比例增强。这样，我们可以通过荧光信号的变化来实时监控PCR产物量的变化，得到一条扩增曲线。
实时荧光定量PCR扩增曲线有基线期、指数期和平台期各阶段。
基线期，荧光信号基本为背景信号，无法辨别产物的荧光信号值；
指数期，荧光信号超过背景信号进入指数增长阶段的阈值，此时循环数称为 Ct ( Cycle threshold) 值，PCR模板起始浓度的对数值与Ct呈线性关系。
平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，最终的 PCR产物量不能计算出起始模板拷贝数。

▏ 检测方法

定量方法包括绝对定量分析和相对定量分析，采用SYBR Green I法和Taqman探针法。
绝对定量分析：绝对定量法也称作标准曲线法，是一种利用已知的标准曲线来定量未知样本目的模板起始量的方法。以 5-6 个点梯度稀释所得的标准品（科佰可以提供大量验证过的标准品）为模板，经实时荧光定量 PCR 扩增，以目的模板初始拷贝数的对数为横坐标，检测到的 CT 值为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程，将未知样本的 CT值带入该方程即可计算出目的模板的起始量。
相对定量分析：相对定量可分析某一靶基因在不同样品之间、同一样品的不同部位之间以及某一样品的某一部位在不同动态时期之间的 mRNA 水平上表达量的比值，也可分析靶基因与内参基因在同一样品中拷贝数的比值。

▏ 应用领域

实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强、快速高效的特点，广泛应用于生物医药、临床诊断、农业、环境科学等多个领域，常用于检测基因表达、基因变异、转基因等。

▏ 服务流程

科佰生物已通过ISO9001和ISO13485双体系认证，同时将按照CNAS体系要求来执行QPCR检测的各流程，质量有保证。

▏ 案例展示

案例一 新冠病毒（SARS-CoV-2）检测
应用描述：qPCR被广泛应用于新冠病毒的核酸检测，作为诊断的金标准。
技术细节：针对病毒RNA的特定区域（如ORF1ab、N基因等）设计引物和探针，通过逆转录qPCR（RT-qPCR）检测病毒RNA。
优势：高灵敏度、高特异性，可快速获得检测结果，支持大规模筛查。

案例二 转基因作物检测
应用描述：qPCR用于检测食品或农产品中是否存在转基因成分（如转基因大豆、玉米）
技术细节：提取肿瘤组织RNA，逆转录为cDNA后，使用qPCR检测特定基因的表达量。
优势：高精度定量，可用于个性化医疗和治疗方案的优化。

案例三 乳腺癌基因表达分析
应用描述：通过qPCR检测乳腺癌相关基因（如BRCA1、HER2）的表达水平，评估患者的治疗反应和预后。
技术细节：针对转基因作物特定的外源基因序列（如35S启动子、NOS终止子）设计引物和探针，进行定量检测。
优势：快速、准确，满足食品安全监管需求。

案例四 肠道菌群定量分析
应用描述：qPCR用于定量分析肠道微生物组中特定菌群的丰度（如乳酸菌、双歧杆菌）
技术细节：设计菌群特异性的16S rRNA基因引物和探针，进行定量检测。
优势：高灵敏度，可精确分析微生物群落结构变化。

案例五 白血病BCR-ABL1标准品开发
应用描述：qPCR用于定量分析比较不同占比的BCR-ABL1标准品
技术细节：设计BCR-ABL1的融合基因引物和探针，进行定量检测。
优势：高灵敏度，可精确分析低频比例的变化。